2025年04月10日 星期四 首页   |    期刊介绍   |    编 委 会   |    投稿指南   |    期刊订阅   |    统合信息   |    联系我们
计量学报  2023, Vol. 44 Issue (3): 368-376    DOI: 10.3969/j.issn.1000-1158.2023.03.08
  电离辐射、标准物质与生物计量 本期目录 | 过刊浏览 | 高级检索 |
PIK3CA基因突变数字PCR参考测量方法研究
王蕾蕾1,2,王霞2,邢德纯1,董莲华2,杨靖亚1
1.上海海洋大学食品学院,上海2 01306
2.中国计量科学研究院前沿计量科学中心,北京 100029
Research on Digital PCR Reference Measurement Method of PIK3CA Gene Mutation
WANG Lei-lei1,2,WANG Xia2,XING De-chun1,DONG Lian-hua2,YANG Jing-ya1
1. College of Food Sciences & Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China
2. Frontier Metrology Science Center, National Institute of Metrology, Beijing 100029, China
全文: PDF (2866 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 PIK3CA突变检测是实现肿瘤个体化治疗的重要预测因子。以PIK3CA为目的基因,选择E542K、E545K、H1047R三个热点突变,建立对其准确定量检测的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)方法。优化退火温度、引物探针浓度等条件,对方法特异性、线性范围、重复性等方面进行考察。结果表明,建立的ddPCR检测方法精密度好,在突变丰度(0.05~82.75)%范围内相对标准偏差值介于(0.392~14.031)%,准确性高,与重量法的相关系数达到99.91%、99.98%、99.94%;在突变丰度0.2%以上,方法的重复性可达5%以内;在突变丰度0.2%以下,重复性保持在15%以下。在20μL反应体系中3个热点突变的空白限分别为0.03%、 0.04%、0.04%,检测下限和定量下限均为0.05%。因此,所建立的PIK3CA基因E542K、E545K及H1047R位点突变的ddPCR参考测量灵敏度高,重复性好,在癌症诊断、个体化用药指导和预后方面具有良好的应用。
服务
把本文推荐给朋友
加入我的书架
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章
王蕾蕾
王霞
邢德纯
董莲华
杨靖亚
关键词 计量学PIK3CA基因突变数字PCR定量    
Abstract:PIK3CA mutation detection is an important predictor for realizing individualized treatment of tumors. Therefore, using PIK3CA as the target gene, three hotspot mutations, E542K, E545K, and H1047R, were selected to establish a droplet digital polymerase chain reaction (ddPCR) method for accurate and quantitative detection. The annealing temperature, primer probe concentration and other conditions were optimized, and the specificity, linear range and repeatability of the method were investigated. The results show that the established ddPCR detection method has good precision, the relative standard deviation value is between 0.392%~14.031% in the abundance range of 0.05%~82.75%, and the accuracy is high. The correlation coefficient with gravimetric method reach 99.91%, 99.98%, 99.94%, when the mutation abundance is above 0.2%, the repeatability of the method can reach within 5%, and when the mutation abundance is below 0.2%, the repeatability remains below 15%. The limit of blank of the three hot spot mutations in the 20μL reaction system are 0.03%, 0.04%, 0.04%, and the lower limit of detection and lower limit of quantification are both 0.05%. Therefore, the ddPCR reference measurement of PIK3CA gene E542K, E545K and H1047R mutations has high sensitivity and good repeatability, and has good applications in cancer diagnosis, individualized medication guidance and prognosis.
Key wordsmetrology    PIK3CA    gene mutation    digital PCR    quantitative
收稿日期: 2021-02-02      发布日期: 2023-03-08
PACS:  TB99  
基金资助:国家质量基础共性关键技术重点研发专项 (2017YFF0204605);中国计量科学研究院基本科研业务费 (AKY1929)
通讯作者: 董莲华(1981--),河北涞水人,中国计量科学研究院研究员,博士,主要从事生物计量方面的研究工作。Email:donglh@nim.ac.cn 杨靖亚(1976-),陕西宝鸡人,上海海洋大学副教授,博士,主要从事海洋生物制药方面的研究工作。Email:jyyang@shou.edu.cn     E-mail: lianhuadong@126.com
作者简介: 王蕾蕾(1994-),江苏盐城人,上海海洋大学硕士研究生,研究方向为核酸计量。Email:959319303@qq.com
引用本文:   
王蕾蕾,王霞,邢德纯,董莲华,杨靖亚. PIK3CA基因突变数字PCR参考测量方法研究[J]. 计量学报, 2023, 44(3): 368-376.
WANG Lei-lei,WANG Xia,XING De-chun,DONG Lian-hua,YANG Jing-ya. Research on Digital PCR Reference Measurement Method of PIK3CA Gene Mutation. Acta Metrologica Sinica, 2023, 44(3): 368-376.
链接本文:  
http://jlxb.china-csm.org:81/Jwk_jlxb/CN/10.3969/j.issn.1000-1158.2023.03.08     或     http://jlxb.china-csm.org:81/Jwk_jlxb/CN/Y2023/V44/I3/368
京ICP备:14006989号-1
版权所有 © 《计量学报》编辑部
地址:北三环东路18号(北京1413信箱)  邮编:100029 电话:(010)64271480
本系统由北京玛格泰克科技发展有限公司设计开发  技术支持:support@magtech.com.cn