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计量学报  2017, Vol. 38 Issue (2): 247-251    DOI: 10.3969/j.issn.1000-1158.2017.02.27
  电离辐射、标准物质与生物计量 本期目录 | 过刊浏览 | 高级检索 |
数字PCR方法准确测量质粒DNA拷贝浓度
董莲华,隋志伟,王晶,傅博强
中国计量科学研究院, 北京 100029
Accurate Plasmid DNA Copy Concentration Quantification by Digital PCR
DONG Lian-hua,SUI Zhi-wei,WANG Jing,FU Bo-qiang
National Institute of Metrology, Beijing 100029, China
全文: PDF (964 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 中国计量科学研究院(NIM)利用数字PCR技术针对国际比对样品质粒DNA,通过设计2对特异性的引物和探针、优化PCR扩增体系、排除PCR mastermix中的DNA污染,成功建立了定量该质粒DNA的数字PCR方法。比较了采用单重PCR和双重PCR方法定量结果之间的差异,最终实现了对比对样品的定量和不确定度评定。对线性质粒样品的测量结果及其扩展不确定度(k=2)为(8.06±0.55)×103 copies/mg,该结果在比对参考值不确定度范围内,且与参考值非常接近。
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作者相关文章
董莲华
隋志伟
王晶
傅博强
关键词 计量学质粒DNA数字PCR拷贝浓度国际比对可比性    
Abstract:NIM established two digital polymerase chain reaction (dPCR) assays for quantifying the plasmid DNA sample, including designing two pairs of specific primer and probe, optimizing PCR amplifying conditions and excluding the DNA contamination in the PCR mastermix. The measurement results by simplex and duplex dPCR are compared. The DNA sample is successfully quantified by the established dPCR method and the measurement uncertainty is eventually evaluated. The measurement result with its expanded uncertainty (k=2) is (8.06±0.55)×103copies/mg, it agree well with the reference value within the standard uncertainty and very close to the reference value.
Key wordsmetrology    plasmid DNA    dPCR    copyconcentration    international comparison    comparability
收稿日期: 2015-11-09      发布日期: 2017-02-28
PACS:  TB99  
基金资助:中国计量科学研究院基本业务费(AKY1323,AKY1408);公益行业专项(AHY1504)
通讯作者: 董莲华     E-mail: lianhuadong@126.com
作者简介: 董莲华(1981-),河北涞水人,中国计量科学研究院副研究员,博士,主要从事生物计量研究。donglh@nim.ac.cn
引用本文:   
董莲华,隋志伟,王晶,傅博强. 数字PCR方法准确测量质粒DNA拷贝浓度[J]. 计量学报, 2017, 38(2): 247-251.
DONG Lian-hua,SUI Zhi-wei,WANG Jing,FU Bo-qiang. Accurate Plasmid DNA Copy Concentration Quantification by Digital PCR. Acta Metrologica Sinica, 2017, 38(2): 247-251.
链接本文:  
http://jlxb.china-csm.org:81/Jwk_jlxb/CN/10.3969/j.issn.1000-1158.2017.02.27     或     http://jlxb.china-csm.org:81/Jwk_jlxb/CN/Y2017/V38/I2/247
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